การผลิตและลักษณะสมบัติของโมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อไซโตโครม P4501A (CYP1A) ในปลากะพงขาว (Lates calcarifer Bloch) ที่ได้รับสารเบนโซ[เอ]ไพรีน

Abstract

การผลิตโมโนโคลนอลแอนติบอดีที่มีความจำเพาะต่อไซโตโครม P4501A (CYP1A) ของปลากะพงขาว (Lates calcarifer Bloch) ที่ได้รับสารเบนโซ[เอ]ไพรีน  โดยการฉีดกระตุ้นหนูขาวด้วย CYP1A จากตับปลากะพงขาวสกัดจำนวน 4 ครั้ง จากนั้นนำม้ามหนูที่ตอบสนองต่อแอนติเจนมาหลอมกับ myelomas เพื่อผลิตเซลล์ลูกผสม  คัดเลือกโคลนที่มีคุณสมบัติจำเพาะต่อ CYP1A จากตับปลากะพงขาวสกัด ที่มีน้ำหนักโมเลกุล 56 และ 74 กิโลดาลตัน โดยเทคนิค dot blot และ western blot พบโมโนโคลนอลแอนติบอดีที่มีความจำเพาะต่อ CYP1A จำนวน 3 โคลน  ได้แก่  MAb- sea bass CYP1A 1.4-3D,  2.3-4G-6E  และ 155-4D  ที่มีไอโซไทป์ เป็น IgG1, IgG1 และ IgM  ตามลำดับ     โมโนโคลนอลที่ผลิตได้นี้จัดได้เป็น 2 กลุ่มตามความจำเพาะของ CYP1A ในรูปแบบเสียสภาพ (denatured) และรูปแบบไม่เสียสภาพ (native form)  ได้แก่  กลุ่มที่ 1  จำเพาะต่อ CYP1A ในรูปแบบเสียสภาพเท่านั้น   มี 2 โคลน ได้แก่ MAb-sea bass CYP1A 1.4-3D  และ  2.3-4G-6E  และ  กลุ่มที่ 2  จำเพาะต่อ CYP1A ทั้งในรูปแบบเสียสภาพ และรูปแบบไม่เสียสภาพ มี 1 โคลน  ได้แก่ MAb-sea bass CYP1A 155-4D   ซึ่งแอนติบอดีที่ผลิตได้นี้สามารถนำไปใช้ตรวจสอบ CYP1A ได้ด้วยเทคนิค dot blot, western blot และ immunohistochemistry หรือพัฒนาเทคนิค ELISA ได้ต่อไปนอกจากนี้ พบว่าโมโนโคลนอลแอนติบอดีที่ผลิตได้ทั้ง 3 โคลนนี้มีสมบัติในการเกิดปฏิกิริยาข้ามกลุ่มได้กับปลาทะเลชนิดต่าง ๆ  ปลาน้ำกร่อย และปลาน้ำจืดบางชนิดได้  คำสำคัญ  :  ไซโตโครม P4501A  โมโนโคลนอลแอนติบอดี  ปลากะพงขาว พีเอเอช  เบนโซ[เอ]ไพรีน